Huile essentielle pure de Saposhnikovia divaricata pour la fabrication de bougies et de savons, en gros, pour diffuseurs à roseaux.

brève description :

 

2.1. Préparation de l'EDS

Les rhizomes de SD ont été achetés sous forme de plante séchée auprès de la société Hanherb Co. (Guri, Corée). L'identification taxonomique du matériel végétal a été confirmée par le Dr Go-Ya Choi de l'Institut coréen de médecine orientale (KIOM). Un spécimen de référence (n° 2014 SDE-6) a été déposé à l'Herbier coréen des ressources phytosanitaires standard. 320 g de rhizomes séchés de SD ont été extraits deux fois à l'éthanol à 70 % (à reflux pendant 2 h), puis l'extrait a été concentré sous pression réduite. La décoction a été filtrée, lyophilisée et conservée à 4 °C. Le rendement en extrait sec par rapport à la matière première brute était de 48,13 % (m/m).

 

2.2. Analyse quantitative par chromatographie liquide à haute performance (CLHP)

L'analyse chromatographique a été réalisée à l'aide d'un système HPLC (Waters Co., Milford, MA, États-Unis) et d'un détecteur à barrette de diodes. Pour l'analyse HPLC du SDE, le prim-OL'étalon de -glucosylcimifugine a été acheté auprès de l'Institut coréen de promotion de l'industrie de la médecine traditionnelle (Gyeongsan, Corée), etsec-O-glucosylhamaudol et 4′-O-β-D-glucosyl-5-OLe -méthylvisamminol a été isolé dans notre laboratoire et identifié par des analyses spectrales, principalement par RMN et MS.

Des échantillons de SDE (0,1 mg) ont été dissous dans 10 mL d'éthanol à 70 %. La séparation chromatographique a été réalisée sur une colonne XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, États-Unis). La phase mobile était composée d'acétonitrile (A) et d'une solution aqueuse d'acide acétique à 0,1 % (B) à un débit de 1,0 mL/min. Un programme de gradient à plusieurs étapes a été utilisé : 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) et 20–65 % A (23–40 min). La longueur d'onde de détection a été balayée de 210 à 400 nm et enregistrée à 254 nm. Le volume d'injection était de 10,0μL. Des solutions étalons pour le dosage de trois chromones ont été préparées à une concentration finale de 7,781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugine), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-méthylvisamminol), et 31,125 mg/mL (sec-O-glucosylhamaudol) dans du méthanol et conservé à 4°C.

2.3. Évaluation de l'activité anti-inflammatoireIn vitro

2.3.1. Culture cellulaire et traitement des échantillons

Les cellules RAW 264.7 ont été obtenues auprès de l'American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, États-Unis) et cultivées dans du milieu DMEM contenant 1 % d'antibiotiques et 5,5 % de FBS. Les cellules ont été incubées dans une atmosphère humidifiée à 5 % de CO2 à 37 °C. Pour stimuler les cellules, le milieu a été remplacé par du milieu DMEM frais, et du lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, États-Unis) a été ajouté à 1μOn a ajouté g/mL en présence ou en absence de SDE (200 ou 400μg/mL) pendant 24 h supplémentaires.

2.3.2. Détermination de l'oxyde nitrique (NO), de la prostaglandine E2 (PGE2) et du facteur de nécrose tumorale.α(TNF-α) et la production d'interleukine-6 ​​(IL-6)

Les cellules ont été traitées avec du SDE et stimulées avec du LPS pendant 24 h. La production de NO a été analysée en mesurant les nitrites à l'aide du réactif de Griess selon une étude précédente [12Sécrétion des cytokines inflammatoires PGE2, TNF-αL'IL-6 a été dosée par ELISA (kit R&D Systems) selon les instructions du fabricant. Les effets du SDE sur la production de NO et de cytokines ont été déterminés à 540 nm ou 450 nm à l'aide d'un spectrophotomètre Wallac EnVision.™lecteur de microplaques (PerkinElmer).

2.4. Évaluation de l'activité anti-arthrosiqueIn vivo

2.4.1. Animaux

Des rats mâles Sprague-Dawley (âgés de 7 semaines) ont été achetés auprès de Samtako Inc. (Osan, Corée) et hébergés dans des conditions contrôlées avec un cycle lumière/obscurité de 12 heures.°C et% d'humidité. Les rats ont reçu une alimentation de laboratoire et de l'eau.ad libitumToutes les procédures expérimentales ont été réalisées conformément aux directives des National Institutes of Health (NIH) et approuvées par le comité d'éthique en matière d'expérimentation animale de l'université de Daejeon (Daejeon, République de Corée).

2.4.2. Induction de l'OA avec MIA chez le rat

Les animaux ont été randomisés et assignés à des groupes de traitement avant le début de l'étude (par groupe). Solution de MIA (3 mg/50μUne solution saline à 0,9 % (L) a été injectée directement dans l'espace intra-articulaire du genou droit sous anesthésie induite par un mélange de kétamine et de xylazine. Les rats ont été répartis aléatoirement en quatre groupes : (1) le groupe témoin (solution saline) sans injection de MIA, (2) le groupe MIA avec injection de MIA, (3) le groupe traité par SDE (200 mg/kg) avec injection de MIA, et (4) le groupe traité par indométacine (IM) (2 mg/kg) avec injection de MIA. Les rats ont reçu du SDE et de l'IM par voie orale une semaine avant l'injection de MIA, et ce pendant quatre semaines. Les doses de SDE et d'IM utilisées dans cette étude étaient basées sur celles employées dans des études précédentes.10,13,14].

2.4.3. Mesures de la répartition du poids sur les pattes postérieures

Après l'induction de l'arthrose, l'équilibre initial de la capacité de charge des pattes postérieures a été perturbé. Un testeur d'incapacité (Linton Instrumentation, Norfolk, Royaume-Uni) a été utilisé pour évaluer les changements de tolérance à la charge. Les rats ont été placés avec précaution dans la chambre de mesure. La force de charge exercée par le membre postérieur a été moyennée sur une période de 3 s. Le rapport de répartition du poids a été calculé par l'équation suivante : [poids sur le membre postérieur droit / (poids sur le membre postérieur droit + poids sur le membre postérieur gauche)] × 100 [15].

2.4.4. Mesure des taux de cytokines sériques

Les échantillons de sang ont été centrifugés à 1 500 g pendant 10 min à 4 °C ; le sérum a ensuite été recueilli et conservé à −70 °C jusqu’à son utilisation. Les taux d’IL-1β, IL-6, TNF-α, et PGE2 dans le sérum ont été mesurés à l'aide de kits ELISA de R&D Systems (Minneapolis, MN, États-Unis) conformément aux instructions du fabricant.

2.4.5. Analyse RT-PCR quantitative en temps réel

L'ARN total a été extrait du tissu articulaire du genou à l'aide du réactif TRIzol® (Sigma-Aldrich, Saint-Louis, Missouri, États-Unis), rétrotranscrit en ADNc et amplifié par PCR à l'aide du kit One Step RT-PCR avec SYBR Green (Applied Biosystems, Grand Island, New York, États-Unis). La PCR quantitative en temps réel a été réalisée à l'aide du système de PCR en temps réel 7500 d'Applied Biosystems (Applied Biosystems, Grand Island, New York, États-Unis). Les séquences des amorces et de la sonde sont présentées dans le tableau.1Des aliquotes d'ADNc d'échantillons et une quantité égale d'ADNc de GAPDH ont été amplifiées avec le mélange maître de PCR universel TaqMan® contenant l'ADN polymérase, conformément aux instructions du fabricant (Applied Biosystems, Foster City, CA, États-Unis). Les conditions de PCR étaient les suivantes : 2 min à 50 °C, 10 min à 94 °C, 15 s à 95 °C et 1 min à 60 °C, pendant 40 cycles. La concentration du gène cible a été déterminée par la méthode comparative Ct (nombre de cycles seuil au point d'intersection entre la courbe d'amplification et le seuil), conformément aux instructions du fabricant.

Prix ​​FOB :0,5 à 9 999 $ US / pièce

Quantité minimale de commande :100 pièces

Capacité d'approvisionnement :10 000 pièces par mois